VPH por PCR Multiplex PDF Imprimir Correo electrónico
Escrito por F. Romero   
Jueves 11 de Marzo de 2010 11:59

Los sistemas de detección de VPH actuales detectan la presencia de ADN viral en la muestra para establecer la presencia de una infección. Los métodos más comunes detectan el ADN viral por hibridación con sondas de RNA VPH-específicas, o por reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para amplificar fragmentos de ADN viral.
La hibridación con sondas específicas es el sistema usado en la Captura de Híbridos (Hybrid Capture II). Es un sistema sencillo de usar y fácil de instalar, sin embargo, sólo detecta la presencia de VPH de alto o bajo riesgo, no reporta el tipo viral específico (VPH 16, 18, etc.).
La detección por reacción de PCR utiliza iniciadores consenso: fragmentos de ADN que dirigen la amplificación específica de fragmentos de ADN de VPH presentes en la muestra. Se les denomina iniciadores consenso porque pueden reconocer regiones de ADN presentes en la secuencia de varios VPH a detectar. La reacción de PCR amplifica un fragmento sólo cuando hay ADN viral en la muestra. Para determinar el tipo (VPH 16, 18, etc.), el fragmento amplificado se identifica por reacción de secuenciación, hibridación o digestión con enzimas de restricción.

 

PCR consenso

 

Las dos principales desventajas de la detección por PCR con iniciadores consenso son:

1. La variable sensibilidad de la reacción a los distintos tipos virales. Algunos tipos virales son preferentemente amplificados por tener una mayor afinidad a los iniciadores, por lo que para detectar confiablemente todos los posibles tipos de VPH es necesario utilizar dos o tres sistemas distintos de iniciadores consenso.
2. La poca sensibilidad de detección en infecciones múltiples. Al tener más de un VPH en una muestra, se produce un fenómeno de competencia por los iniciadores. El VPH con más afinidad por los iniciadores consenso es el que resulta amplificado, y el o los VPH con menor afinidad no son amplificados ni detectados. Es decir, si están presentes dos o más diferentes tipos de VPH (relativamente frecuente en muestras de pacientes jóvenes), sólo uno de ellos es amplificado y por consiguiente reportado.

PCR consenso dos infecciones

Detección por PCR Multiplex
Ante esta situación, se propuso desarrollar un nuevo sistema de detección, utilizando una reacción de PCR en formato multiplex, y con iniciadores específicos a cada uno de los tipos virales de alto riesgo de importancia clínica. La detección por PCR Multiplex permite detectar todos y cada uno de los 15 tipos de VPH de alto riesgo y 3 de probable alto riesgo, en muestras cervicales, uretrales y biopsias de tejido. Cada par de iniciadores específicos presentan afinidad exclusiva con sólo un tipo de VPH, por lo que presentan una misma sensibilidad a cada uno de los VPH presentes, ya sea en infecciones sencillas o múltiples. Adicionalmente, la identificación y tipificación se da en un solo paso, pues la tipificación se realiza en base al patrón de amplificación.

PCR multiplex gel

El resultado de este estudio como se puede observar, reporta la presencia de VPH tipo 6 (de bajo riesgo) y VPH tipo 16 (de alto riesgo)

PCR multiplex dos infecciones

Última actualización el Jueves 11 de Marzo de 2010 15:18